Plásmido Doble Nickase (h) LAP2: sc-403613-NIC

El TMPO humano codifica el polipéptido 2 asociado a la lámina (LAP2), una proteína de la membrana nuclear interna que se une a las láminas y a la cromatina para organizar la arquitectura nuclear y regular la estabilidad del genoma. Las isoformas de LAP2 contribuyen al ensamblaje de la envoltura nuclear, al anclaje lámina–cromatina y a la reconstitución del núcleo acoplada al ciclo celular tras la mitosis, influyendo en programas de transcripción y en el tiempo de replicación del ADN. A través de estas funciones estructurales y regulatorias, TMPO se conecta con vías que controlan la organización de la cromatina, la mecanotransducción hacia el núcleo y el mantenimiento de la integridad nuclear. La desregulación de las interacciones envoltura nuclear–cromatina que involucran a TMPO/LAP2 se ha asociado con una morfología nuclear anormal y se ha estudiado en el contexto de mecanismos de enfermedades proliferativas y degenerativas en las que la estructura nuclear se ve alterada.

LAP2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TMPO en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TMPO. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TMPO. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TMPO alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.