Partículas Lentivirales de Activación (m) LAMP-2: sc-421383-LAC

Lamp2 codifica la glucoproteína de membrana asociada a lisosomas 2 (LAMP-2), un componente principal de la membrana limitante lisosomal que mantiene la integridad del lisosoma y el tráfico de membranas. LAMP-2 es clave en las vías de autofagia-lisosoma, incluida la autofagia mediada por chaperonas y la fusión entre autofagosoma y lisosoma, influyendo así en el control de calidad de las proteínas, la renovación de orgánulos y las respuestas celulares al estrés. La alteración de la actividad de LAMP-2 perturba la función lisosomal y el flujo autofágico, procesos implicados en la homeostasis de los cardiomiocitos, el mantenimiento del músculo esquelético y los mecanismos neurodegenerativos. En sistemas murinos, Lamp2 se utiliza ampliamente para estudiar la biología lisosomal, el inmunometabolismo y las consecuencias celulares de una depuración defectuosa de macromoléculas.

Las partículas de activación lentiviral LAMP-2 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Lamp2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral LAMP-2 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Lamp2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de LAMP-2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Lamp2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.