LAMP-2 Double Nickase Plasmid (h): sc-400215-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das LAMP-2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- LAMP-2 Double-Nickase-Plasmid (h) und LAMP-2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf LAMP2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: LAMP-2: sc-18822
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
LAMP-2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400215-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LAMP-2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400215-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LAMP2 kodiert das lysosomenassoziierte Membranglykoprotein 2 (LAMP-2), einen Hauptbestandteil der lysosomalen Grenzmembran, der die Integrität des Lysosoms sowie seine proteolytische Funktion unterstützt. LAMP-2 ist an endosomal-lysosomalem Transport und autophagiebezogenen Prozessen beteiligt, darunter die chaperonvermittelte Autophagie und die Fusion von Autophagosom und Lysosom, und beeinflusst dadurch den Abbau zytosolischer Proteine und Organellen. Über diese Signal- und Abbauwege trägt LAMP-2 zur Koordination zellulärer Antworten auf Nährstoffstress, zur Qualitätskontrolle und zum immunbezogenen Abbau internalisierten Materials bei. Eine veränderte LAMP2-Funktion und lysosomale Dysfunktion sind mit Erkrankungen verknüpft, die ausgeprägte Defekte in Autophagie und Proteinhomöostase zeigen, was LAMP2 zu einem zentralen Knotenpunkt für mechanistische Studien der Lysosomenbiologie macht.
LAMP-2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des LAMP2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von LAMP2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die LAMP2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit LAMP2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.