Plásmido CRISPR de Activación (h) LAMP-2: sc-400215-ACT

LAMP2 codifica la proteína de membrana asociada a lisosomas 2 (LAMP-2), una glucoproteína principal de la membrana lisosomal necesaria para la biogénesis y la integridad de los lisosomas. LAMP-2 sostiene el flujo autofágico y las vías de degradación lisosomal, incluida la macroautofagia y la autofagia mediada por chaperonas, influyendo así en el recambio de proteínas, lípidos y orgánulos dañados. A través de su papel en el tráfico endolisosomal y en los eventos de fusión, LAMP-2 afecta las respuestas al estrés celular, la homeostasis metabólica y el procesamiento de antígenos. La expresión o la función alteradas de LAMP2 se vinculan a fenotipos relacionados con el almacenamiento lisosomal y la autofagia, y se han asociado con cardiomiopatía y miopatía esquelética en la enfermedad de Danon, así como con mecanismos más amplios de enfermedades neurodegenerativas e inflamatorias que implican una depuración lisosomal deficiente.

LAMP-2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LAMP2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

LAMP-2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LAMP2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LAMP2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LAMP-2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LAMP2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LAMP-2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LAMP-2 en células tumorales con expresión de LAMP2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.