Plásmido CRISPR de Activación (h) Laminin β-2: sc-402612-ACT

LAMB2 codifica la laminina β2, una subunidad central de los heterotrímeros de laminina presentes en las membranas basales, que sostiene la arquitectura tisular y la adhesión célula–matriz. La laminina β2 contribuye al ensamblaje y a la señalización de la matriz extracelular a través de vías asociadas a integrinas y distroglicano, influyendo en la organización del citoesqueleto, la polaridad celular y la diferenciación. En la membrana basal glomerular del riñón y en las sinapsis neuromusculares, la laminina β2 es importante para la integridad de la barrera de filtración y la maduración sináptica, respectivamente. La función desregulada o deficiente de LAMB2 se asocia con trastornos de la membrana basal y se estudia con frecuencia en contextos como la biología de los podocitos, los mecanismos de lesión glomerular y la remodelación de la matriz extracelular.

Laminin β-2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LAMB2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Laminin β-2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LAMB2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LAMB2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Laminin β-2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LAMB2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Laminin β-2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Laminin β-2 en células tumorales con expresión de LAMB2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.