Laminin α-3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421376

Descripción general

Lama3 codifica la laminina α-3, una subunidad clave de la laminina-332 que se integra en las membranas basales para sostener la adhesión de las células epiteliales, su polaridad y la migración dirigida. Al unirse a integrinas y colaborar con componentes de los hemidesmosomas, la laminina α-3 ayuda a coordinar la dinámica de las adhesiones focales y la organización del citoesqueleto a través de vías de señalización vinculadas a la adhesión, como FAK/SRC y PI3K–AKT. En tejidos de ratón, Lama3 contribuye al anclaje epidermis–dermis y a la integridad de la barrera epitelial, y su desregulación se estudia con frecuencia en contextos de reepitelización deficiente de heridas y de interacciones epitelio–estroma alteradas. Los modelos experimentales dirigidos a Lama3 se utilizan para investigar el ensamblaje de la matriz extracelular, la mecanotransducción célula–matriz y la remodelación de la membrana basal relevantes para la homeostasis tisular y los microambientes asociados a enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Laminin α-3 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Lama3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Lama3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Lama3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Laminin α-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Lama3 para la investigación de la señalización de Laminin α-3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Lama3 críticos para la función de Laminin α-3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Lama3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Laminin α-3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Laminin α-3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Lama3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Laminin α-3 (m) y el plásmido HDR Laminin α-3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Lama3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Lama3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.