Plasmide CRISPR d'Activation (h) Lamin B1: sc-400032-ACT

LMNB1 code la lamine B1, un composant majeur de la lamina nucléaire qui soutient l’architecture du noyau et ancre l’hétérochromatine périphérique. La lamine B1 coordonne l’organisation de la chromatine, la réplication et la réparation de l’ADN, ainsi que la dynamique de l’enveloppe nucléaire au cours de la mitose, en intégrant des signaux mécaniques aux programmes transcriptionnels. Grâce à ses interactions avec les domaines associés à la lamina (LAD) et les complexes du pore nucléaire, elle contribue à réguler la stabilité du génome et la progression du cycle cellulaire. Des altérations de la dose de LMNB1 ou de l’intégrité de la lamina nucléaire ont été associées à des phénotypes neurodégénératifs et démyélinisants, et sont fréquemment étudiées dans le contexte des laminopathies, des défauts nucléaires liés au vieillissement et de la plasticité des cellules cancéreuses.

Lamin B1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LMNB1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Lamin B1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LMNB1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LMNB1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Lamin B1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LMNB1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Lamin B1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Lamin B1 dans les cellules tumorales présentant une expression de LMNB1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.