Plasmide CRISPR/Cas9 KO LAIR-1 (h): sc-403542

Présentation

LAIR1 code pour le récepteur 1 de type immunoglobuline associé aux leucocytes (LAIR-1), un récepteur inhibiteur du collagène largement exprimé sur les cellules immunitaires, notamment les lymphocytes T, les lymphocytes B, les cellules NK, les monocytes et les cellules dendritiques. Lorsqu’il se lie aux collagènes de la matrice extracellulaire, LAIR-1 transmet un signal via des motifs ITIM qui recrutent des phosphatases telles que SHP-1/2, atténuant les voies des récepteurs de l’antigène et des récepteurs Fc, et limitant l’activation, la production de cytokines et la cytotoxicité. Cette fonction de type « point de contrôle » relie les signaux de la matrice tissulaire à l’homéostasie immunitaire et influence le trafic des leucocytes ainsi que les seuils inflammatoires. Une signalisation dérégulée de LAIR-1 a été associée à une altération de la régulation immunitaire dans l’auto-immunité, l’inflammation chronique, les infections et l’immunosuppression liée aux tumeurs, ce qui en fait une cible utile pour des études de mécanique immunologique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LAIR-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène LAIR1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du LAIR1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert LAIR1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LAIR-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en LAIR1 pour l'étude de la signalisation de LAIR-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de LAIR1 essentiels à la fonction de LAIR-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de LAIR1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LAIR-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le LAIR-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus LAIR1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LAIR-1 plasmide HDR (h) et le LAIR-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie LAIR1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles LAIR1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.