L-type Ca++ CP γ3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406760
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- L-type Ca++ CP γ3 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico L-type Ca++ CP γ3, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: L-type Ca++ CP γ3 Antibody (A-07): sc-81889
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
L-type Ca++ CP γ3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-406760 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
CACNG3 codifica la subunità ausiliaria γ3 del canale umano del Ca++ di tipo L, una proteina regolatoria transmembrana che modula il traffico e le proprietà biofisiche dei canali del calcio voltaggio-dipendenti di tipo L. Regolando l’ingresso di calcio, γ3 influenza l’eccitabilità di membrana, l’accoppiamento stimolo–secrezione e i programmi trascrizionali calcio-dipendenti che modellano la segnalazione neuronale e muscolare. La regolazione dei canali associata a CACNG3 interseca vie Ca2+-dipendenti come la segnalazione calmodulina/CaMK e calcineurina–NFAT, con effetti sulla plasticità sinaptica e sull’espressione genica dipendente dall’attività. Alterazioni dell’espressione di CACNG3 o della composizione del complesso del canale sono state esplorate in studi su fenotipi neuropsichiatrici e disturbi legati all’eccitabilità, in cui l’alterata omeostasi del calcio rappresenta un tema meccanicistico ricorrente.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO L-type Ca++ CP γ3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CACNG3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CACNG3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CACNG3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina L-type Ca++ CP γ3.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CACNG3 per lo studio della segnalazione di L-type Ca++ CP γ3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni CACNG3 critici per la funzione di L-type Ca++ CP γ3
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CACNG3 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal L-type Ca++ CP γ3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal L-type Ca++ CP γ3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CACNG3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal L-type Ca++ CP γ3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR L-type Ca++ CP γ3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CACNG3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CACNG3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.