L-type Ca++ CP γ1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419413
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- L-type Ca++ CP γ1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico L-type Ca++ CP γ1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
L-type Ca++ CP γ1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419413 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Cacng1 codifica la subunidad auxiliar γ1 del canal de Ca++ tipo L, una proteína de membrana con cuatro dominios transmembrana que modula las propiedades biofísicas y la expresión en membrana de los complejos de canales de calcio dependientes de voltaje en tejidos excitables. Al ajustar el influjo de Ca++, influye en el acoplamiento excitación–contracción, la señalización dependiente de la actividad y las vías reguladas por Ca++ aguas abajo que determinan la fisiología muscular y la excitabilidad celular. La regulación alterada de los componentes del canal de Ca++ tipo L se ha asociado con perturbaciones de la homeostasis del calcio vinculadas a fenotipos funcionales neuromusculares y cardíacos, lo que convierte a Cacng1 en un locus útil para diseccionar la biología de las subunidades auxiliares del canal en modelos murinos. Los estudios funcionales suelen examinar cómo las subunidades γ afectan la compuerta (gating) del canal, su tráfico y el acoplamiento a respuestas transcripcionales dependientes de Ca++.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO L-type Ca++ CP γ1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Cacng1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Cacng1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Cacng1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína L-type Ca++ CP γ1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Cacng1 para la investigación de la señalización de L-type Ca++ CP γ1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Cacng1 críticos para la función de L-type Ca++ CP γ1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Cacng1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido L-type Ca++ CP γ1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido L-type Ca++ CP γ1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Cacng1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR L-type Ca++ CP γ1 (m) y el plásmido HDR L-type Ca++ CP γ1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Cacng1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Cacng1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.