Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
L-type Ca++ CP β2 Plasmide Double Nickase (h): sc-403900-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- L-type Ca++ CP β2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il L-type Ca++ CP β2 Double Nickase Plasmid (h) e il L-type Ca++ CP β2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CACNB2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: L-type Ca++ CP β2 Antibody (F-29): sc-81890
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
L-type Ca++ CP β2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403900-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
L-type Ca++ CP β2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403900-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CACNB2 codifica la subunità accessoria β2 dei canali del calcio di tipo L voltaggio‑dipendenti, regolando il traffico del canale, l’espressione sulla membrana e le cinetiche di gating che modellano l’influsso di Ca2+ durante la depolarizzazione. Modulando l’attività dei canali CaV1, CACNB2 influenza l’accoppiamento eccitazione–contrazione, la trasmissione sinaptica e la regolazione genica dipendente dall’attività attraverso vie sensibili al calcio come CaMK e la segnalazione calcineurina/NFAT. Un’alterazione della funzione di CACNB2 è stata associata ad anomalie elettriche e di segnalazione nei tessuti eccitabili ed è spesso studiata nel contesto della suscettibilità alle aritmie, di fenotipi neuropsichiatrici e di altri disturbi correlati ai canali del calcio. In quanto subunità accessoria, β2 influisce anche sulla sensibilità farmacologica e sulle proprietà biofisiche delle correnti di Ca2+ di tipo L, risultando quindi rilevante per studi meccanicistici sulle canalopatie.
L-type Ca++ CP β2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CACNB2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CACNB2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CACNB2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CACNB2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.