Plasmide Double Nickase (h) L-type Ca⁺⁺ CP α1S: sc-402713-NIC

CACNA1S code la sous-unité α1S formant le pore du canal calcique de type L du muscle squelettique (CaV1.1), qui agit comme principal capteur de voltage dans le couplage excitation–contraction. Lors de la dépolarisation membranaire, CaV1.1 communique avec la signalisation du récepteur à la ryanodine afin de coordonner la libération de Ca2+ par le réticulum sarcoplasmique et la régulation en aval, dépendante du Ca2+, de la contraction musculaire et des programmes d’expression génique. Ce complexe canal s’intègre aux voies d’excitabilité membranaire et d’homéostasie du calcium qui façonnent la physiologie des fibres musculaires et la signalisation dépendante de l’activité. Des variations génétiques de CACNA1S ont été associées à des canalopathies du muscle squelettique affectant la gestion du Ca2+ et la fonction contractile, ce qui soutient sa pertinence pour des études mécanistiques de phénotypes neuromusculaires.

L-type Ca++ CP α1S Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CACNA1S dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CACNA1S. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CACNA1S. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CACNA1S.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.