L-Selectin/CD62L/SELL Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422872

Descripción general

Sell codifica la L-selectina (CD62L), un receptor de adhesión leucocitaria que media el homing de los linfocitos y el rodamiento de los leucocitos sobre vénulas de endotelio alto mediante su unión a addressinas de ganglio periférico y a otros ligandos glicanos sulfatados y sialilados. En las células inmunitarias de ratón, el desprendimiento (shedding) y el tráfico de CD62L coordinan las transiciones entre fenotipos naïve, de memoria central y activados, conectando la dinámica de adhesión con la migración impulsada por quimiocinas y la vigilancia inmunitaria. La señalización de SELL y la escisión de su ectodominio se entrecruzan con cascadas inflamatorias y con la activación endotelial, modulando el reclutamiento de leucocitos durante la lesión tisular y la infección. La alteración del tráfico dependiente de L-selectina se estudia con frecuencia en modelos de autoinmunidad, inflamación crónica e inmunología tumoral, donde la localización celular y el cebado influyen en los fenotipos de la enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO L-Selectin/CD62L/SELL (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Sell en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Sell junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Sell tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína L-Selectin/CD62L/SELL.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Sell para la investigación de la señalización de L-Selectin/CD62L/SELL, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Sell críticos para la función de L-Selectin/CD62L/SELL
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Sell para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido L-Selectin/CD62L/SELL CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido L-Selectin/CD62L/SELL CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Sell. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR L-Selectin/CD62L/SELL (m) y el plásmido HDR L-Selectin/CD62L/SELL (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Sell para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Sell definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.