Plásmido Doble Nickase (h2) L-ficolin: sc-404837-NIC-2
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h2)L-ficolin consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa L-ficolin (h2) y el plásmido de doble nickasa L-ficolin (h22) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a FCN2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: L-ficolin Anticuerpo (FCN219): sc-130297
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h2) L-ficolin | sc-404837-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El FCN2 humano codifica la L-ficolina, una lectina soluble de reconocimiento de patrones producida principalmente por el hígado que inicia la vía de las lectinas del complemento al unirse a motivos carbohidratados microbianos y de lo propio alterado y reclutar proteasas MASP para impulsar la activación de C4/C2, la opsonización y la señalización inflamatoria. Mediante la modulación de la depuración dependiente del complemento, la aglutinación y la participación de los fagocitos, la L-ficolina contribuye a la homeostasis de la inmunidad innata en la interfaz entre la infección y la inflamación estéril. La variación genética o la expresión desregulada de FCN2 se ha asociado con una susceptibilidad alterada a enfermedades infecciosas y con fenotipos inflamatorios, lo que respalda su uso como un nodo molecular que vincula la actividad del complemento, las respuestas hepáticas de fase aguda y las interacciones huésped–patógeno. Los modelos de edición génica o de perturbación de FCN2 permiten estudios mecanísticos de la activación del complemento por la vía de las lectinas, el reconocimiento dependiente de glicanos y las vías efectoras inmunitarias posteriores en sistemas celulares e in vitro relevantes.
L-ficolin El plásmido de doble nicasa (h2) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FCN2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FCN2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FCN2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FCN2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.