Plásmido CRISPR de Activación (h) KV4.2: sc-402801-ACT

KCND2 codifica la subunidad del canal de potasio dependiente de voltaje KV4.2, un mediador principal de las corrientes rápidas transitorias de tipo A de K+ en neuronas y cardiomiocitos. Al modular la repolarización del potencial de acción, la adaptación de la frecuencia de disparo y las señales que se propagan hacia atrás, KV4.2 influye en la excitabilidad, la integración sináptica y la plasticidad dependiente de la actividad, con regulación mediante fosforilación y subunidades auxiliares como KChIPs y DPP6/10. Las alteraciones vinculadas a KCND2 en la expresión o en la compuerta (gating) del canal se han asociado con fenotipos neurológicos, incluidos la epilepsia y trastornos del neurodesarrollo, y la dinámica de repolarización dependiente de KV4.2 es relevante para estudios de susceptibilidad a arritmias y de electrofisiología cardíaca. Estas propiedades hacen de KCND2 una diana útil para investigar la biología de los canales iónicos, los circuitos de excitabilidad y las vías de señalización que ajustan la conductancia de la membrana.

KV4.2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KCND2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

KV4.2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KCND2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KCND2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de KV4.2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KCND2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de KV4.2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía KV4.2 en células tumorales con expresión de KCND2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.