KV1.6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-409638

Descripción general

KCNA6 codifica la subunidad del canal de potasio dependiente de voltaje KV1.6, un rectificador tardío relacionado con Shaker que da forma a la repolarización del potencial de acción y regula la frecuencia de disparo neuronal. Al contribuir a la estabilidad del potencial de membrana y a la excitabilidad, KV1.6 influye en la señalización sináptica y en las oscilaciones de la red, integrándose en procesos de señalización eléctrica controlados por el flujo de iones dependiente del voltaje. Los canales de la familia KV1 participan en vías que modulan la liberación de neurotransmisores, la conducción axonal y la excitabilidad dependiente de la actividad, y la alteración de la conductancia de potasio es ampliamente relevante para trastornos de hiperexcitabilidad neuronal. La variación o la expresión desregulada de genes de canales de K⁺ dependientes de voltaje se ha asociado con fenotipos neurológicos, lo que respalda el uso de la perturbación de KCNA6 para estudiar mecanismos vinculados a la excitabilidad en modelos celulares humanos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO KV1.6 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen KCNA6 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del KCNA6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de KCNA6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína KV1.6.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en KCNA6 para la investigación de la señalización de KV1.6, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de KCNA6 críticos para la función de KV1.6
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de KCNA6 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido KV1.6 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido KV1.6 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus KCNA6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR KV1.6 (h) y el plásmido HDR KV1.6 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología KCNA6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana KCNA6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.