Plásmido Doble Nickase (h) KV1.5: sc-404341-NIC

KCNA5 codifica la subunidad humana del canal de potasio dependiente de voltaje KV1.5, una conductancia rectificadora retardada que modela la repolarización de la membrana y controla la excitabilidad celular. En tejidos cardíacos y excitables, KV1.5 contribuye a la duración del potencial de acción y se integra con redes de homeostasis iónica que regulan el manejo del calcio y la señalización eléctrica. El canal también influye en programas de proliferación y migración en células no excitables mediante el control, dependiente del potencial de membrana, de la señalización y de los puntos de control del ciclo celular. La expresión alterada de KCNA5 o la función del canal se ha asociado con fenotipos de electrofisiología auricular y con mecanismos más amplios relevantes para canalopatías, lo que respalda su uso en estudios de remodelado eléctrico y transducción de señales.

KV1.5 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus KCNA5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de KCNA5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de KCNA5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con KCNA5 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.