Plasmide CRISPR/Cas9 KO KV1.3 (m): sc-421214
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- KV1.3 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique KV1.3, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: KV1.3 Antibody (G-9): sc-398855
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO KV1.3 (m) | sc-421214 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Kcna3 code pour le canal potassique voltage-dépendant KV1.3, un canal de la famille Shaker qui régule le potentiel de membrane et l’efflux de potassium afin de moduler la signalisation calcique, les seuils d’activation et l’excitabilité électrique. Dans les cellules immunitaires et gliales, l’activité de KV1.3 influence des cascades de signalisation liées à la prolifération, à la production de cytokines et à la reprogrammation métabolique en contrôlant des programmes transcriptionnels dépendants du Ca2+. La fonction du canal s’articule avec des voies qui régissent la progression du cycle cellulaire et les réponses au stress, et une activité altérée de KV1.3 a été associée à une dérégulation immunitaire et à des mécanismes inflammatoires. Dans le système nerveux, KV1.3 contribue à l’excitabilité et à la dynamique de signalisation pertinentes pour la neuroinflammation et la communication neurone–glie.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO KV1.3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Kcna3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Kcna3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Kcna3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine KV1.3.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Kcna3 pour l'étude de la signalisation de KV1.3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Kcna3 essentiels à la fonction de KV1.3
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Kcna3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le KV1.3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le KV1.3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Kcna3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le KV1.3 plasmide HDR (m) et le KV1.3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Kcna3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Kcna3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.