Plasmide CRISPR d'Activation (h) Ksr-1: sc-401768-ACT

Le gène humain **KSR1** code **Ksr-1**, une protéine d’échafaudage qui coordonne **RAF**, **MEK** et **ERK** afin de moduler l’amplitude et la durée de la signalisation **MAPK/ERK**. En organisant des complexes de kinases dans des sites subcellulaires spécifiques, Ksr-1 influence la prolifération en réponse aux facteurs de croissance, la différenciation, la progression du cycle cellulaire et les programmes de survie. Le réglage de la sortie de la voie ERK dépendant de KSR1 s’inscrit au croisement du contrôle par rétroaction, des entrées issues des récepteurs à activité tyrosine kinase et de nœuds de signalisation sensibles au stress. Une activité dérégulée de la voie MAPK impliquant KSR1 a été étudiée dans le contexte de la signalisation oncogénique, de phénotypes invasifs et d’une plasticité cellulaire altérée, ce qui soutient sa pertinence pour des études mécanistiques en biologie du cancer et en transduction du signal.

Ksr-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KSR1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Ksr-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KSR1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KSR1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Ksr-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KSR1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Ksr-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Ksr-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de KSR1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.