Plásmido CRISPR de Activación (h) Krs-2: sc-403632-ACT

STK4 codifica la quinasa de serina/treonina Krs-2 (también conocida como MST1), un componente central de la red de señalización Hippo que integra señales de estrés para regular la proliferación, la apoptosis y la homeostasis tisular. En células humanas, la activación de STK4 influye en cascadas de quinasas y programas transcripcionales, incluida la modulación de la actividad de YAP/TAZ y la interacción con nodos de señalización de MAPK y del sistema inmunitario. Krs-2 participa en el control de las respuestas al estrés oxidativo, la dinámica del citoesqueleto y la función de los linfocitos, vinculándola con la aptitud celular y la regulación de la inflamación. La señalización alterada de STK4 se ha asociado con un control del crecimiento desregulado y disfunción inmunitaria, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de biología del cáncer y fenotipos relacionados con el sistema inmunitario.

Krs-2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de STK4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Krs-2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus STK4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional STK4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Krs-2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo STK4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Krs-2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Krs-2 en células tumorales con expresión de STK4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.