KRAS CRISPR Activationプラスミド (m): sc-421333-ACT

Kras は小型GTPアーゼである KRAS をコードしており、活性化受容体型チロシンキナーゼから下流の RAF–MEK–ERK 経路および PI3K–AKT–mTOR 経路へシグナルを伝達する中心的な分子スイッチである。KRAS は GDP 結合型と GTP 結合型の状態を循環することで、増殖、分化、生存、代謝適応を制御し、その制御は GEF と GAP により厳密に調節されている。KRAS シグナルの破綻は細胞周期制御やストレス応答プログラムを乱し、がん遺伝子性シグナルネットワーク、組織恒常性、腫瘍―微小環境相互作用を解析するためのマウスモデルで広く利用されている。KRAS は複数の上流入力を統合し、広範な転写および翻訳後の出力を統率するため、経路マッピングやエピスタシス解析における重要な結節点である。

KRAS CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Krasの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

KRAS CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Kras 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKras転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性KRASの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKras遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるKRAS依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKras発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるKRAS経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。