KOR-3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402526

Panoramica

OPRL1 codifica il recettore della nocicettina/orfanina FQ (detto anche KOR-3), un GPCR di classe A che si accoppia principalmente a Gi/Go per sopprimere l’attività dell’adenilato ciclasi, ridurre la segnalazione del cAMP e modulare la conduttanza dei canali ionici. L’attivazione del recettore regola la trasmissione sinaptica e l’eccitabilità neuronale, influenzando il controllo, mediato da neuropeptidi, dell’elaborazione del dolore, della responsività allo stress, dei circuiti della ricompensa e delle funzioni autonome. La segnalazione a valle interseca le vie MAPK/ERK, il traffico dipendente da β-arrestina e i processi di desensibilizzazione/internalizzazione del recettore, che nel tempo modellano le risposte cellulari. Alterazioni della segnalazione OPRL1/KOR-3 sono state associate a fenotipi neuropsichiatrici e neurocomportamentali, rendendolo rilevante per studi meccanicistici sulla regolazione delle reti neurali e sulla dinamica della segnalazione dei GPCR.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO KOR-3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene OPRL1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del OPRL1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto OPRL1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina KOR-3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di OPRL1 per lo studio della segnalazione di KOR-3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni OPRL1 critici per la funzione di KOR-3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di OPRL1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal KOR-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal KOR-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus OPRL1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal KOR-3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR KOR-3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia OPRL1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio OPRL1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.