Plasmide CRISPR/Cas9 KO KOR-3 (h): sc-402526

Présentation

OPRL1 code le récepteur de la nociceptine/orphanine FQ (également appelé KOR-3), un RCPG de classe A qui se couple principalement à Gi/Go afin d’inhiber l’activité de l’adénylate cyclase, de réduire la signalisation dépendante de l’AMPc et de moduler la conductance des canaux ioniques. L’activation du récepteur régule la transmission synaptique et l’excitabilité neuronale, influençant le contrôle, médié par des neuropeptides, du traitement de la douleur, de la réactivité au stress, des circuits de la récompense et des fonctions autonomes. La signalisation en aval interfère avec les voies MAPK/ERK, le trafic dépendant de la β-arrestine et les processus de désensibilisation/internalisation du récepteur, qui façonnent les réponses cellulaires au cours du temps. Des altérations de la signalisation OPRL1/KOR-3 ont été associées à des phénotypes neuropsychiatriques et neurocomportementaux, ce qui en fait une cible pertinente pour les études mécanistiques de la régulation des réseaux neuronaux et de la dynamique de la signalisation des RCPG.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO KOR-3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène OPRL1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du OPRL1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert OPRL1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine KOR-3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en OPRL1 pour l'étude de la signalisation de KOR-3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de OPRL1 essentiels à la fonction de KOR-3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de OPRL1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le KOR-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le KOR-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus OPRL1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le KOR-3 plasmide HDR (h) et le KOR-3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie OPRL1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles OPRL1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.