KLHL9 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-433908

Descripción general

Klhl9 codifica la proteína murina KLHL9, un adaptador de sustratos de la familia BTB–BACK–Kelch que coopera con complejos de ligasa E3 de ubiquitina CUL3-RBX1 para promover la ubiquitinación y el recambio de proteínas cliente específicas dependiente del proteasoma. Mediante este control de la proteostasis mediado por ubiquitina, KLHL9 contribuye a la regulación del control de calidad proteico, de procesos vinculados al ciclo celular y de salidas de señalización que dependen de la eliminación oportuna de sustratos. La alteración de los adaptadores CUL3–KLHL es ampliamente relevante para vías de ubiquitina desreguladas implicadas en el neurodesarrollo, la biología neuromuscular y la remodelación del proteoma asociada al cáncer, lo que convierte a Klhl9 en un nodo útil para estudiar la especificidad del sistema ubiquitina–proteasoma. En modelos murinos, los enfoques de pérdida de función permiten dilucidar cómo la selección de sustratos dependiente de KLHL9 moldea fenotipos celulares posteriores en tejidos o tipos celulares definidos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO KLHL9 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Klhl9 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Klhl9 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Klhl9 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína KLHL9.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Klhl9 para la investigación de la señalización de KLHL9, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Klhl9 críticos para la función de KLHL9
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Klhl9 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido KLHL9 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido KLHL9 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Klhl9. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR KLHL9 (m) y el plásmido HDR KLHL9 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Klhl9 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Klhl9 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.