Plásmido CRISPR de Activación (h) KLF3: sc-402926-ACT

KLF3 (factor similar a Krüppel 3) es un factor de transcripción con dedos de zinc que se une a elementos reguladores ricos en GC para coordinar programas de expresión génica que controlan la maduración eritroide, la adipogénesis y decisiones más amplias de linaje hematopoyético. Al funcionar en gran medida como un represor transcripcional dependiente del contexto mediante interacciones con complejos correaguladores, KLF3 modula el estado de la cromatina e influye en la salida transcripcional dependiente de la ARN polimerasa II. Las redes asociadas a KLF3 se entrecruzan con vías reguladoras metabólicas e inmunitarias, incluidos módulos génicos relacionados con la membrana eritrocitaria y la globina, así como circuitos transcripcionales inflamatorios. La actividad desregulada de KLF3 se ha asociado con estados de diferenciación alterados y con la reprogramación transcripcional observada en investigaciones sobre enfermedades hematológicas y metabólicas, lo que lo convierte en una diana útil para estudios mecanísticos de la identidad celular y de los circuitos de regulación génica.

KLF3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KLF3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

KLF3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KLF3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KLF3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de KLF3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KLF3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de KLF3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía KLF3 en células tumorales con expresión de KLF3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.