KLF12 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403992-ACT

KLF12 (Krüppel-like factor 12) ist ein C2H2-Zinkfinger-Transkriptionsfaktor, der an GC-reiche Promotorelemente bindet und so Genexpressionsprogramme reguliert, die Proliferation, Differenzierung und die epithelial–mesenchymale Plastizität steuern. Als nuklearer Regulator ist KLF12 in Transkriptionsnetzwerke eingebunden, die den Zellzyklusverlauf und die Linienspezifizierung prägen, mit nachgeschalteten Effekten auf die Organisation des Zytoskeletts und die Zellmotilität. Eine veränderte KLF12-Aktivität oder -Expression wurde mit einer dysregulierten transkriptionellen Kontrolle in krebsrelevanten Prozessen in Verbindung gebracht, darunter Invasion und metastatisches Verhalten, und wurde zudem in Entwicklungs- sowie endokrin relevanten genregulatorischen Kontexten untersucht. Die Modulation der KLF12-Spiegel bietet einen gut handhabbaren Ansatz, um von Transkriptionsfaktoren getriebene Regulationsschaltkreise und kontextspezifische Enhancer-Promotor-Kontrolle zu analysieren.

KLF12 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen KLF12-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

KLF12 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des KLF12-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der KLF12-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen KLF12-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native KLF12-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von KLF12-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des KLF12-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem KLF12-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.