Plasmide CRISPR d'Activation (h) KLF12: sc-403992-ACT

KLF12 (Krüppel-like factor 12) est un facteur de transcription à doigts de zinc C2H2 qui se fixe sur des éléments promoteurs riches en GC afin de réguler des programmes d’expression génique contrôlant la prolifération, la différenciation et la plasticité épithélio-mésenchymateuse. En tant que régulateur nucléaire, KLF12 s’intègre à des réseaux transcriptionnels qui façonnent la progression du cycle cellulaire et la spécification des lignages, avec des effets en aval sur l’organisation du cytosquelette et la motilité cellulaire. Une activité ou une expression altérée de KLF12 a été associée à une dérégulation du contrôle transcriptionnel dans des processus liés au cancer, notamment l’invasion et le comportement métastatique, et a également été étudiée dans des contextes de régulation génique pertinents pour le développement et l’endocrinologie. La modulation des niveaux de KLF12 constitue une approche accessible pour disséquer des circuits de régulation pilotés par des facteurs de transcription et le contrôle, spécifique au contexte, des interactions enhancer–promoteur.

KLF12 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KLF12 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

KLF12 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KLF12 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KLF12, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de KLF12. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KLF12 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de KLF12 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie KLF12 dans les cellules tumorales présentant une expression de KLF12 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.