Plásmido CRISPR de Activación (h) KIR3.2: sc-405031-ACT

KCNJ6 codifica la subunidad humana del canal de potasio rectificador hacia adentro KIR3.2 (GIRK2), un efector clave de la señalización de receptores acoplados a proteína G que ayuda a estabilizar el potencial de membrana en reposo y a amortiguar la excitabilidad celular. Tras la activación, la subunidad Gβγ liberada por receptores acoplados a Gi/o favorece la apertura del canal, acoplando las entradas de neurotransmisores y neuromoduladores a la conductancia de potasio en neuronas y otras células excitables. KIR3.2 contribuye a la regulación del disparo de potenciales de acción, la integración sináptica y las oscilaciones de red, lo que la vincula con vías que moldean las respuestas neurofisiológicas. La actividad o expresión desregulada de KCNJ6 se ha asociado con alteraciones en la señalización neuronal y se ha investigado en contextos como fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos, así como la susceptibilidad a crisis convulsivas.

KIR3.2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KCNJ6 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

KIR3.2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KCNJ6 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KCNJ6, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de KIR3.2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KCNJ6 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de KIR3.2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía KIR3.2 en células tumorales con expresión de KCNJ6 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.