Plásmido Doble Nickase (h) KIR3.1: sc-404965-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)KIR3.1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa KIR3.1 (h) y el plásmido de doble nickasa KIR3.1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a KCNJ3. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: KIR3.1 Anticuerpo (A-4): sc-365457
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) KIR3.1 | sc-404965-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) KIR3.1 | sc-404965-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano **KCNJ3** codifica la subunidad **KIR3.1 (GIRK1)** del canal de potasio rectificador hacia el interior activado por proteínas G, la cual se ensambla con otras subunidades GIRK para formar canales heterotetraméricos que acoplan la señalización de los **GPCR** con la hiperpolarización de la membrana. Al regular la conductancia de **K+**, KIR3.1 modula la excitabilidad celular, los patrones de disparo y la señalización dependiente de calcio, conectando las entradas de neurotransmisores y neuromoduladores con respuestas electrofisiológicas aguas abajo. La actividad de KCNJ3/KIR3.1 se integra con las vías GPCR–Gβγ y con procesos de homeostasis iónica que influyen en la función de las redes neuronales y en la electrofisiología cardíaca. Las alteraciones en la expresión o la función de los canales GIRK se han asociado con fenotipos de excitabilidad desregulada y se han investigado en contextos que incluyen mecanismos neuropsiquiátricos y relacionados con arritmias.
KIR3.1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus KCNJ3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de KCNJ3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de KCNJ3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con KCNJ3 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.