Plásmido CRISPR de Activación (h) KIR2.1: sc-401974-ACT

KCNJ2 codifica la subunidad del canal de potasio rectificador entrante KIR2.1, un determinante clave del potencial de membrana en reposo y de la repolarización del potencial de acción en células excitables. Al conducir corrientes IK1, KIR2.1 estabiliza la excitabilidad de la membrana y modula el comportamiento electrofisiológico en músculo cardíaco y esquelético, integrándose con vías de homeostasis iónica que acoplan el voltaje de membrana con el manejo del calcio y la contractilidad. La desregulación de la actividad o la expresión de KCNJ2 se asocia con fenotipos hereditarios de arritmia y disfunción neuromuscular, lo que lo convierte en un objetivo relevante para estudios mecanísticos de canalopatías y señalización eléctrica. In vitro, la modulación de los niveles de KIR2.1 se utiliza habitualmente para explorar programas transcripcionales dependientes del potencial de membrana, umbrales de excitabilidad e interacciones entre redes de canales iónicos.

KIR2.1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KCNJ2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

KIR2.1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KCNJ2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KCNJ2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de KIR2.1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KCNJ2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de KIR2.1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía KIR2.1 en células tumorales con expresión de KCNJ2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.