Plásmido CRISPR de Activación (h) Kindlin-1: sc-412553-ACT

FERMT1 codifica kindlina-1, un adaptador de adhesión focal que se une a las colas citoplasmáticas de la integrina β para promover la activación de integrinas, la adhesión célula–matriz y la remodelación del citoesqueleto de actina. La kindlina-1 sostiene la integridad epitelial, la migración de queratinocitos y la homeostasis tisular al coordinar la señalización de la quinasa ligada a integrinas, la dinámica de las adhesiones focales y las vías de mecanotransducción. La alteración de FERMT1 se asocia con el síndrome de Kindler y se ha vinculado con cambios en la señalización dependiente de la adhesión y con disfunción de la barrera en la piel y los epitelios mucosos. En modelos de biología del cáncer y de reparación de heridas, la expresión de kindlina-1 puede modular el comportamiento invasivo y las interacciones con la matriz extracelular mediante vías mediadas por integrinas.

Kindlin-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FERMT1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Kindlin-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FERMT1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FERMT1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Kindlin-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FERMT1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Kindlin-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Kindlin-1 en células tumorales con expresión de FERMT1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.