KIF3A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421275

Descripción general

Kif3a codifica el miembro de la familia de quinesinas KIF3A, una subunidad motora central del complejo quinesina-2 heterotrimérico que impulsa el transporte intraflagelar anterógrado a lo largo de los microtúbulos. KIF3A es esencial para el ensamblaje y el mantenimiento del cilio primario, lo que permite la transducción de señales dependiente de cilios, incluida la actividad de la vía Hedgehog, así como procesos más amplios de tráfico ciliar que influyen en decisiones sobre el destino celular. En sistemas murinos, la función de Kif3a está estrechamente ligada a la morfogénesis tisular y a programas de señalización homeostática que dependen de cilios intactos, relacionando su alteración con fenotipos relevantes para las ciliopatías. Como resultado, KIF3A se utiliza con frecuencia para dilucidar cómo el transporte basado en microtúbulos se integra con la señalización del desarrollo y con la regulación, mediada por cilios, de la proliferación y la diferenciación.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO KIF3A (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Kif3a en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Kif3a junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Kif3a tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína KIF3A.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Kif3a para la investigación de la señalización de KIF3A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Kif3a críticos para la función de KIF3A
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Kif3a para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido KIF3A CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido KIF3A CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Kif3a. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR KIF3A (m) y el plásmido HDR KIF3A (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Kif3a para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Kif3a definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.