KIAA1731 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406955

Descripción general

CEP295 (KIAA1731) codifica una proteína centrosomal esencial para el ensamblaje de los centríolos y la maduración del centrosoma, apoyando la formación del material pericentriolar y el funcionamiento adecuado del centro organizador de microtúbulos. Participa en procesos que coordinan la conversión de centríolo a centrosoma, la duplicación del centrosoma y la formación correcta del huso durante la mitosis, contribuyendo así a la estabilidad del genoma. La alteración de la integridad del centrosoma dependiente de CEP295 puede provocar una progresión mitótica aberrante e inestabilidad cromosómica, estados celulares que se estudian con frecuencia en biología del cáncer. CEP295 también es relevante en investigaciones sobre ciliogénesis y control del ciclo celular, donde los defectos del centrosoma pueden modificar la dinámica de señalización y los programas de diferenciación.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO KIAA1731 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CEP295 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CEP295 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CEP295 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína KIAA1731.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CEP295 para la investigación de la señalización de KIAA1731, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CEP295 críticos para la función de KIAA1731
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CEP295 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido KIAA1731 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido KIAA1731 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CEP295. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR KIAA1731 (h) y el plásmido HDR KIAA1731 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CEP295 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CEP295 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.