KIAA1432 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-417074

Descripción general

RIC1 (KIAA1432) codifica un componente conservado del complejo factor de intercambio de nucleótidos de guanina RIC1–RGP1, que regula el tráfico de membranas dependiente de Rab6. Este complejo favorece el anclaje y el transporte retrógrado desde los endosomas hacia la red trans-Golgi y contribuye a la organización del aparato de Golgi, al acoplamiento de vesículas y a la secreción polarizada. Por su papel en el mantenimiento de la integridad del Golgi y la fidelidad del transporte intracelular, KIAA1432 es relevante para fenotipos celulares vinculados a la migración, la adhesión y la proteostasis. La desregulación del tráfico vesicular y de las vías asociadas al Golgi se implica con frecuencia en la biología de enfermedades proliferativas y del neurodesarrollo, lo que convierte a RIC1 en un objetivo útil para estudios mecanísticos de la señalización dependiente del tráfico.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO KIAA1432 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RIC1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RIC1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RIC1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína KIAA1432.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RIC1 para la investigación de la señalización de KIAA1432, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de RIC1 críticos para la función de KIAA1432
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RIC1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido KIAA1432 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido KIAA1432 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RIC1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR KIAA1432 (h) y el plásmido HDR KIAA1432 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RIC1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RIC1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.