Plásmido CRISPR de Activación (h) KIAA0947: sc-411728-ACT

ICE1 humano (también conocido como KIAA0947) codifica una proteína reguladora nuclear implicada en el control transcripcional y en programas de respuesta al estrés celular. La actividad asociada a ICE1 se ha relacionado con la regulación de la expresión génica dependiente de la cromatina y con la coordinación de salidas de señalización que influyen en la progresión del ciclo celular y en el estado de diferenciación. Se han observado alteraciones en la expresión o en la conectividad de la red de ICE1/KIAA0947 en múltiples contextos relevantes para enfermedades, lo que respalda su uso como un nodo para investigar circuitos transcripcionales desregulados en fenotipos complejos. Como diana de investigación, ICE1/KIAA0947 resulta útil para desentrañar efectos a nivel de vía derivados del aumento de la expresión endógena del gen sobre transcriptomas aguas abajo.

KIAA0947 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ICE1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

KIAA0947 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ICE1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ICE1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de KIAA0947. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ICE1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de KIAA0947 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía KIAA0947 en células tumorales con expresión de ICE1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.