KIAA0664 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407383

Übersicht

CLUH (auch bekannt als KIAA0664) kodiert ein zytosolisches RNA-bindendes Protein, das die mitochondriale Biogenese mit der räumlichen Organisation der Mitochondrien koppelt, indem es die Stabilität, Lokalisation und Translation nukleär kodierter mRNAs für mitochondriale Proteine reguliert. Es trägt zur Kapazität der oxidativen Phosphorylierung und zur zellulären Energiehomöostase bei und beeinflusst über die Kontrolle mitochondrienassoziierter Genexpressionsprogramme Prozesse wie Stressantworten und metabolische Anpassung. Eine Störung der CLUH-vermittelten mitochondrialen Regulation kann die respiratorische Funktion beeinträchtigen, die mitochondriale Verteilung verändern und Signalwege beeinflussen, die Zellwachstum und Überleben steuern. Entsprechend ist CLUH für die Forschung zu mitochondrialer Dysfunktion und stoffwechselassoziierten Krankheitsmechanismen relevant, auch in Kontexten, in denen veränderte Bioenergetik und Organelldynamik charakteristische Merkmale sind.

Das KIAA0664 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CLUH-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CLUH-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CLUH nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die KIAA0664-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CLUH-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der KIAA0664-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CLUH-Exone abzielen, die für die KIAA0664-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CLUH-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom KIAA0664 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom KIAA0664 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CLUH-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das KIAA0664 HDR-Plasmid (h) und KIAA0664 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CLUH-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CLUH-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.