Partículas Lentivirales de Activación (h) KGA: sc-402575-LAC

El gen humano **GLS** codifica la glutaminasa, y la isoforma de tipo renal **KGA** cataliza en la mitocondria la conversión de glutamina en glutamato y amoníaco, aportando carbono y nitrógeno para el ciclo del TCA, la síntesis de nucleótidos y el equilibrio redox a través del glutatión. Este paso enzimático es central en la glutaminólisis y se coordina con el metabolismo anaplerótico, la homeostasis de aminoácidos y las respuestas celulares al estrés. La actividad alterada de GLS/KGA se estudia con frecuencia en contextos de reprogramación metabólica, incluidas la señalización proliferativa, la adaptación a la hipoxia y el manejo del estrés oxidativo. La utilización desregulada de glutamina y la producción de glutamato se han vinculado a mecanismos relevantes para el metabolismo tumoral, la neurobiología y la activación de células inmunitarias, lo que convierte a GLS en una diana habitual para el análisis de rutas.

Las partículas de activación lentiviral KGA (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de GLS en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral KGA (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción GLS, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de KGA. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo GLS y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.