Plásmido CRISPR de Activación (h) KGA: sc-402575-ACT

El gen humano **GLS** codifica la glutaminasa, y la isoforma de glutaminasa tipo riñón **KGA** cataliza en la mitocondria la conversión de glutamina en glutamato y amoníaco, un paso clave de la glutaminólisis. Esta reacción sustenta la anaplerosis del ciclo del ácido tricarboxílico, el manejo del nitrógeno y la biosíntesis de nucleótidos, aminoácidos y glutatión, vinculando la actividad de GLS con el equilibrio redox y las respuestas celulares al estrés. KGA se integra con programas de detección de nutrientes como la señalización de **mTORC1** y se interconecta con la regulación metabólica impulsada por **MYC**, modulando la proliferación y la supervivencia bajo disponibilidad variable de nutrientes. La desregulación de la expresión o la actividad de **GLS/KGA** se ha asociado con la remodelación metabólica en el cáncer y con alteraciones de la homeostasis del glutamato en contextos neurológicos e inflamatorios, lo que la convierte en un nodo central para estudios mecanísticos de fenotipos dependientes del metabolismo.

KGA El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GLS sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

KGA El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GLS en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GLS, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de KGA. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GLS y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de KGA en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía KGA en células tumorales con expresión de GLS silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.