Ketohexokinase Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421261

Descripción general

Khk codifica la cetohexocinasa (fructocinasa), una enzima clave que cataliza la fosforilación de la fructosa a fructosa-1-fosfato, comprometiendo a la fructosa con el flujo de carbono aguas abajo. En tejidos de ratón con alta capacidad de procesamiento de fructosa, esta actividad se integra con la glucólisis, la gluconeogénesis y un metabolismo más amplio de carbohidratos y energía mediante la regulación de intermediarios de fosfato de triosa y la señalización metabólica hepática. La alteración del metabolismo de la fructosa dependiente de KHK se ha vinculado con fenotipos de estrés metabólico, como la acumulación lipídica desregulada y alteraciones en la señalización de la insulina, lo que convierte a Khk en un nodo útil para estudiar la detección de nutrientes y la remodelación metabólica. Como parte de vías sensibles a la fructosa, la perturbación de la cetohexocinasa puede afectar el equilibrio redox, el uso de ATP y programas transcripcionales que gobiernan la homeostasis de lípidos y glucosa.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Ketohexokinase (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Khk en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Khk junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Khk tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Ketohexokinase.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Khk para la investigación de la señalización de Ketohexokinase, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Khk críticos para la función de Ketohexokinase
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Khk para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Ketohexokinase CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Ketohexokinase CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Khk. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Ketohexokinase (m) y el plásmido HDR Ketohexokinase (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Khk para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Khk definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.