Plásmido CRISPR de Activación (h) Ketohexokinase: sc-403399-ACT

El gen humano **KHK** codifica la **cetohexocinasa**, una fructocinasa enriquecida en hígado y riñón que cataliza la fosforilación de la fructosa a **fructosa-1-fosfato**, iniciando el metabolismo de la fructosa y acoplando el flujo de carbohidratos a vías glucolíticas y lipogénicas posteriores. Al regular el manejo celular de la fructosa dietaria, KHK influye en la utilización de ATP, la homeostasis del fosfato y la partición de metabolitos hacia la síntesis de triglicéridos y el recambio de purinas vinculado al ácido úrico. La actividad alterada de KHK se ha asociado con errores innatos del metabolismo de la fructosa y con fenotipos metabólicos que incluyen acumulación lipídica hepática y señalización relacionada con la resistencia a la insulina. Como nodo del metabolismo del carbono impulsado por la fructosa, KHK se estudia ampliamente en la detección de nutrientes, la reprogramación metabólica de los hepatocitos y las respuestas al estrés vinculadas a la exposición a dietas ricas en fructosa.

Ketohexokinase El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KHK sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Ketohexokinase El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KHK en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KHK, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Ketohexokinase. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KHK y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Ketohexokinase en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Ketohexokinase en células tumorales con expresión de KHK silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.