Plásmido Doble Nickase (h) Keratin 2: sc-402077-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Keratin 2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Keratin 2 (h) y el plásmido de doble nickasa Keratin 2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a KRT2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Keratin 2 | sc-402077-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Keratin 2 | sc-402077-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KRT2 codifica la queratina 2, una proteína de filamentos intermedios de tipo II que se expresa predominantemente en los queratinocitos suprabasales, donde se heterodimeriza con queratinas de tipo I para formar la red del citoesqueleto de la epidermis. La queratina 2 contribuye a la resistencia mecánica, la cohesión célula–célula y la diferenciación adecuada durante la estratificación epidérmica, integrándose con complejos de unión asociados a desmosomas y con la remodelación de los filamentos intermedios en respuesta al estrés. La alteración de la función de KRT2 desorganiza los filamentos y compromete la integridad de la epidermis, y las variantes patogénicas se asocian con trastornos de la queratinización, incluida la ictiosis epidermolítica superficial. Dado que la dinámica de los filamentos de queratina se cruza con vías que controlan la formación de la barrera, la cornificación y las respuestas al estrés mecánico o inflamatorio, KRT2 es una diana útil para estudiar la homeostasis cutánea y la regulación del citoesqueleto.
Keratin 2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus KRT2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de KRT2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de KRT2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con KRT2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.