Plasmide CRISPR/Cas9 KO KCTD3 (h): sc-412124

Présentation

KCTD3 (potassium channel tetramerization domain containing 3) code une protéine contenant un domaine BTB/POZ, impliquée dans des interactions protéine–protéine susceptibles d’orienter l’assemblage de complexes multiprotéiques et d’influencer la protéostase. Les membres de la famille KCTD sont fréquemment associés à la biologie des ligases ubiquitine dépendantes de la culline-3 (CUL3) et à la régulation d’intermédiaires de signalisation via une dégradation ciblée, ce qui suggère des rôles dans l’ajustement des voies et l’homéostasie cellulaire. Par le biais de ces réseaux d’interactions, KCTD3 est pertinent pour l’étude du contrôle de la croissance cellulaire, des réponses au stress et des programmes liés à la différenciation, où le remodelage dépendant de l’ubiquitination est marqué. La dérégulation de complexes centrés sur BTB/KCTD a été associée à des phénotypes pertinents pour des maladies en cancérologie et en neurobiologie, ce qui soutient l’étude de KCTD3 dans des modèles mécanistiques de signalisation altérée et de contrôle qualité des protéines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO KCTD3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KCTD3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KCTD3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KCTD3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine KCTD3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KCTD3 pour l'étude de la signalisation de KCTD3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de KCTD3 essentiels à la fonction de KCTD3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KCTD3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le KCTD3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le KCTD3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KCTD3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le KCTD3 plasmide HDR (h) et le KCTD3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KCTD3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KCTD3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.