Plásmido Doble Nickase (h) KCTD15: sc-407663-NIC

KCTD15 codifica una proteína adaptadora con dominio BTB/POZ perteneciente a la familia KCTD (dominio de tetramerización de canales de potasio), que contribuye a las interacciones proteína–proteína y a la regulación de redes de señalización. KCTD15 se ha vinculado a la modulación de programas transcripcionales que controlan el desarrollo de la cresta neural y la adipogénesis, y con frecuencia se analiza en el contexto de circuitos reguladores relacionados con WNT/β-catenina y los estados de diferenciación celular. Estudios de asociación genética implican loci de KCTD15 en rasgos relacionados con la obesidad, y se han descrito cambios en la expresión de KCTD15 en diversos contextos relevantes para la regulación metabólica y el neurodesarrollo. Estas propiedades hacen de KCTD15 una diana útil para estudiar el diálogo entre vías, la especificación de linaje y las relaciones genotipo–fenotipo en modelos celulares humanos.

KCTD15 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus KCTD15 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de KCTD15. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de KCTD15. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con KCTD15 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.