Particules Lentivirales d'Activation (h) KCTD13: sc-404120-LAC

KCTD13 (potassium channel tetramerization domain containing 13) code une protéine adaptatrice contenant un domaine BTB/POZ, impliquée dans la protéostasie dépendante de l’ubiquitine via des interactions avec les complexes de ligase E3 de l’ubiquitine CUL3. En influençant l’ubiquitination des substrats et leur renouvellement, KCTD13 peut moduler des processus cellulaires incluant la progression du cycle cellulaire, la dynamique du cytosquelette et des programmes de transduction du signal qui façonnent le développement neuronal et la fonction synaptique. Des altérations du dosage de KCTD13 ainsi que des variations régulatrices ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux, notamment à des traits liés aux variations du nombre de copies (CNV) de la région 16p11.2, ce qui étaye sa pertinence dans les études du développement du cerveau et de la connectivité des réseaux. Ces caractéristiques font de KCTD13 un nœud utile pour examiner comment la régulation médiée par l’ubiquitine affecte les voies de signalisation neuronales et prolifératives.

Les particules d'activation lentivirales KCTD13 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de KCTD13 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales KCTD13 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription KCTD13, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de KCTD13. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif KCTD13 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.