KCNQ5 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403289-ACT

KCNQ5 codifica la subunità del canale del potassio voltaggio-dipendente Kv7.5, un membro della famiglia KCNQ/Kv7 che contribuisce alla ripolarizzazione della membrana e al controllo dell’eccitabilità cellulare. Conducendo correnti di potassio di tipo M, KCNQ5 aiuta a regolare il potenziale di membrana a riposo e le proprietà di scarica nelle cellule eccitabili, integrandosi con i processi di trasporto ionico e di segnalazione calcio-dipendente. Alterazioni dell’attività dei canali KCNQ sono ampiamente rilevanti per la neurofisiologia e la trasmissione sensoriale, e la disregolazione della conduttanza del potassio è stata associata a disturbi caratterizzati da eccitabilità neuronale e attività di rete anomale. In ambito di ricerca, la modulazione di KCNQ5 viene utilizzata per studiare la biologia dei canali, i fenotipi elettrofisiologici e gli effetti a livello di via di segnalazione dovuti a un flusso di potassio alterato.

KCNQ5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di KCNQ5 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

KCNQ5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus KCNQ5 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione KCNQ5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di KCNQ5. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus KCNQ5 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da KCNQ5 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via KCNQ5 nelle cellule tumorali con espressione di KCNQ5 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.