KCNQ2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402492-ACT

KCNQ2は電位依存性カリウムチャネルサブユニットKv7.2をコードしており、膜電位を安定化させて反復発火を抑える神経細胞M型K+電流の中核を成す構成要素です。活動電位の閾値形成やスパイク頻度適応を通じて、KCNQ2は大脳皮質および海馬回路の興奮性に影響し、細胞膜でのホスホイノシチド依存性制御を含む、チャネルのゲーティングやトラフィッキングを調節するシグナル伝達とも統合されます。KCNQ2の機能または発現の破綻は、てんかんスペクトラム障害や神経発達表現型と強く関連しており、ヒト神経モデルにおけるイオンチャネル生物学、シナプスネットワーク動態、ならびに遺伝子型—表現型関係を研究するための代表的な座位として広く用いられています。

KCNQ2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性KCNQ2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

KCNQ2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における KCNQ2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKCNQ2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性KCNQ2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKCNQ2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるKCNQ2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKCNQ2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるKCNQ2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。