KCNQ1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400933-NIC

KCNQ1 codifica una subunità α di un canale del potassio voltaggio-dipendente che si assembla in forma tetramerica e, in molti tessuti, si associa alle subunità β della famiglia KCNE per modulare la ripolarizzazione della membrana. Nelle cellule eccitabili, le correnti mediate da KCNQ1 contribuiscono alla terminazione del potenziale d’azione e alla stabilità elettrica, mentre negli epiteli il canale aiuta a regolare il trasporto ionico e l’omeostasi dei fluidi. L’attività del canale è modulata da segnali quali la fosforilazione dipendente da cAMP/PKA e i fosfoinositidi di membrana, collegando KCNQ1 a un controllo più ampio dell’eccitabilità cellulare e dei processi di trasporto. Alterazioni genetiche ed epigenetiche di KCNQ1 sono state associate a fenotipi di aritmia cardiaca e a disregolazione di loci soggetti a imprinting, a conferma della sua rilevanza per studi meccanicistici di elettrofisiologia e regolazione genica.

KCNQ1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KCNQ1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KCNQ1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KCNQ1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KCNQ1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.