Plasmide CRISPR/Cas9 KO karyopherin β2 (h): sc-403099

Présentation

TNPO1 code la karyophérine β2 (transportine-1), un récepteur d’import régulé par RanGTP qui reconnaît les signaux de localisation nucléaire de type PY et assure l’import nucléaire sélectif de protéines liant l’ARN et d’autres cargos à travers le complexe du pore nucléaire. En gouvernant le transport nucléocytoplasmique, la karyophérine β2 influence le métabolisme de l’ARN, la dynamique des granules de stress et la régulation transcriptionnelle, et se rattache à des voies telles que le cycle de Ran et la machinerie de transport du pore nucléaire. Un trafic dépendant de la transportine dérégulé a été impliqué dans des mécanismes liés à la mauvaise localisation et à l’agrégation des protéines, ainsi qu’à des programmes d’expression génique altérés, offrant un point d’entrée fonctionnel pour étudier les défauts de transport dans des états cellulaires associés aux maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO karyopherin β2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TNPO1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TNPO1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TNPO1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine karyopherin β2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TNPO1 pour l'étude de la signalisation de karyopherin β2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TNPO1 essentiels à la fonction de karyopherin β2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TNPO1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le karyopherin β2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le karyopherin β2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TNPO1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le karyopherin β2 plasmide HDR (h) et le karyopherin β2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TNPO1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TNPO1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.