KAI 1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401317-ACT

CD82 (KAI1) ist ein tetraspaninisches Zelloberflächen-Glykoprotein, das Membran-Mikrodomänen organisiert und die Signalübertragung moduliert, indem es mit Integrinen, Rezeptoren der EGFR-Familie und anderen Tetraspaninen interagiert. Über die Regulation von Adhäsion, Migration und Zytoskelettdynamik beeinflusst KAI1 Prozesse wie den Transport von Immunzellen, Interaktionen mit der extrazellulären Matrix und die vesikuläre Kommunikation. CD82 wurde im Kontext der Metastasierungsbiologie umfassend untersucht, wobei eine veränderte Expression mit Änderungen des invasiven Potenzials und mit Phänotypen assoziiert ist, die mit der epithelial-mesenchymalen Transition (EMT) zusammenhängen. Eine Fehlregulation CD82-abhängiger Signalnetzwerke wurde zudem in mehreren Krankheitsmodellen mit Tumorprogression und der Umgestaltung des entzündlichen Mikromilieus in Verbindung gebracht.

KAI 1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CD82-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

KAI 1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CD82-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CD82-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen KAI 1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CD82-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von KAI 1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des KAI 1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CD82-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.