JNK2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400115-ACT

MAPK9 kodiert die c-Jun‑N‑terminale Kinase 2 (JNK2), eine stressaktivierte MAP-Kinase, die entzündliche Zytokine, oxidativen Stress und genotoxische Signale integriert, um die Aktivität von Transkriptionsfaktoren, Apoptose und Zellzyklusprogramme zu regulieren. JNK2 phosphoryliert Substrate wie c-JUN und weitere AP‑1‑Komponenten und verknüpft damit die vorgelagerten MAP3K/MAP2K‑Signalwege mit weitreichenden Veränderungen der Genexpression. Dieser Signalweg trägt zu Immun- und Entzündungsreaktionen, zur Anpassung an neuronalen und metabolischen Stress sowie zur kontextabhängigen Kontrolle von Proliferation und Überleben bei. Eine fehlregulierte JNK2‑Signalgebung wird mit der Krebsbiologie, Neurodegeneration und Mechanismen chronisch-entzündlicher Erkrankungen in Verbindung gebracht, was ihren häufigen Einsatz in Studien zur Untersuchung von Signalwegen und zur Netzwerk-Kartierung erklärt.

JNK2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MAPK9-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

JNK2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MAPK9-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MAPK9-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen JNK2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MAPK9-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von JNK2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des JNK2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MAPK9-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.