Plasmide Double Nickase (h) JMJD5: sc-405787-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) JMJD5 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide JMJD5 Double Nickase (h) et le plasmide JMJD5 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant KDM8. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: JMJD5 Antibody (D-5): sc-377078
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) JMJD5 | sc-405787-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) JMJD5 | sc-405787-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KDM8 (JMJD5) code une dioxygénase contenant un domaine Jumonji C qui agit comme régulateur épigénétique, reliant l’état de la chromatine au contrôle transcriptionnel. JMJD5 a été impliquée dans des activités d’hydroxylation/déméthylation de substrats histoniques et non histoniques, et module des processus tels que la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et l’expression de gènes métaboliques. Par ses interactions avec des complexes transcriptionnels et associés à la chromatine, JMJD5 contribue à la régulation des voies sensibles à l’hypoxie et au stress ainsi qu’à la coordination de programmes prolifératifs. Une activité ou une expression dérégulée de JMJD5 a été associée à des altérations du contrôle de la croissance et du maintien du génome, faisant de KDM8 une cible utile pour des études mécanistiques en biologie du cancer et dans des troubles apparentés.
JMJD5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KDM8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KDM8. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KDM8. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KDM8.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.