Plasmide CRISPR/Cas9 KO JMJD5 (h): sc-405787

Présentation

KDM8 code pour la protéine JMJD5 contenant un domaine Jumonji C, une oxygénase nucléaire impliquée dans la régulation de la chromatine et le contrôle de la transcription via des mécanismes associés à l’hydroxylation/déméthylation des lysines des histones. JMJD5 a été associée à la progression du cycle cellulaire, aux réponses au stress de réplication et à la coordination de programmes d’expression génique qui interfèrent avec la signalisation des dommages à l’ADN et l’adaptation métabolique. Par ces fonctions, JMJD5 peut influencer des voies liées à la prolifération et des états épigénétiques fréquemment altérés dans le cancer et d’autres maladies impliquant une dynamique de la chromatine dérégulée. Ainsi, KDM8/JMJD5 est largement étudié comme un nœud reliant la régulation épigénétique à des sorties transcriptionnelles dépendantes du contexte et à la fitness cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO JMJD5 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KDM8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KDM8, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KDM8 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine JMJD5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KDM8 pour l'étude de la signalisation de JMJD5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de KDM8 essentiels à la fonction de JMJD5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KDM8 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le JMJD5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le JMJD5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KDM8. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le JMJD5 plasmide HDR (h) et le JMJD5 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KDM8 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KDM8 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.